质控菌种管理规定

微生物实验用菌种是进行新产品研发和生产质量控制的标准物质。为了保证微生物实验的准确灵敏和人员及环境的卫生安全，特制定以下规定：1.菌种采集。实验室用菌种一是到国家法定机构采购，二是购买ATCC菌种，三是科研中菌种交流。不管是哪种来源，均由公司统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠，采集迅速，不泄漏不污染。保证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。2.菌种的活化：购买的标准菌种必须要求是冻干粉，科研中菌种交流可以为斜面或液体。菌种的首次活化最好是在非选择性琼脂培养基上，除非特殊情况或特别推荐，一般不用液体培养基。具体使用培养基的情况如下表，详细菌种使用方法见附表：方法培养基方法1胰蛋白月东大豆琼脂（TSA）,非选择性羊血琼脂，PCA或营养琼脂，35c正常环境培养2448小时。方法3巧克力琼脂平板，35c548小时。方法4CDC厌氧血琼脂35c厌氧培养487天，才能充分生长；对于梭菌，以下新鲜培养基也可选用：营养琼脂，TSA琼脂，PCA琼脂，需培养4828C培养372小时。方法7改良罗氏琼脂或Mddlebrook琼脂，35c55天。方法9巧克力琼脂平板，35c524小时，再划线至TSA琼脂35c正常环境培养2448小时，再划线接种至含羊血的哥伦比亚CNA培养基35C5%CO2环境培养2472小时。方法13先接种10B精氨酸肉汤，作系列梯度稀释35c正常培养至培养基变成粉红色，接入A8C冰箱中，可保存330C。若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。

(5)保藏经冻结至150C,液态氮内为40C的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。再打开安甑管，将内容物移入适宜的培养基上培养。此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成抱子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。3.2.2液体石蜡保存法：将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，121C灭菌30分钟，然后放在40c温箱中，使水汽蒸发掉，备用。将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或抱子。用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。1）大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、假单胞杆菌属、沙门氏菌属、副伤寒沙门氏菌、李斯特氏菌属、蜡样芽胞杆菌、八叠球菌、短芽抱杆菌、大肠杆菌HB10

1、大肠杆菌DH5a、猪肺疫、禽多杀性巴氏杆菌（禽霍乱）、猪丹毒、大肠杆菌0

17、大肠菌群、产气肠杆菌、志贺氏菌属；接种于半固体培养基上，361C培养188C冰箱或室温中。可保存124小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于室温。2）产气荚膜梭菌、梭杆菌属、拟杆菌属等厌氧菌、厌氧消化链球菌：接种于CDC厌氧菌琼脂中，培养188C冰箱或室温中。可保存148小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于22年。4）霉菌、白色念珠球菌：接种于PDA培养基中，28c培养248C冰箱或室温中。可保存148小时，加入无菌石蜡油覆盖，保存于22年。6）副嗜血杆菌、淋病奈瑟菌（需510%CO2环境）、流感嗜血杆菌接种于巧克力琼脂，361C培养248c冰箱或室温中。可保存18C冰箱或室温中。可保存1-2年。