实验一蛋白质浓度的测定实验报告

蛋白质浓度的测定一.实验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nmi当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nmi考马斯亮蓝G250-蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感性。在一定范围内，考马斯亮蓝G250-蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系。故可用于蛋白质浓度的测定。二.实验设备与试剂设备：普通离心机，721型分光光度计试剂：标准蛋白液(100ug/ml)三.实验材料新鲜绿豆芽四.实验内容1.标准曲线的制备取9支干净的试管，按表进行编号并加入试剂。1(空白)234XXXX6789标准蛋白液/mL0%Nacl/mL0考马斯亮蓝染液/mL蛋白质含量/(ug/mL)0102XXXX060XXXX1002.样品蛋白的测定

(1)样品蛋白液制备准确称取2g新鲜绿豆芽胚轴的部分，研磨成匀浆，离心分离(4000r/min,10min)。取上清液用nacl定容到10ml。

(2)含量测定另取两只干净的试管，加入样品液，和考马斯亮蓝染液，混匀。室温静置3min,与波长595nm处比色，读取吸光度。五.实验结果1.标准曲线结果如表所示，并以吸光度为纵坐标，个标准液含量为横坐标做标准曲线。试吕勺123XXXX7899蛋白质含量0102XXXX060XXXX0100A595标准曲线OXXX0.度光吸=0.0075_-0.0023R=0.9846_A595线性（A595）50100蛋白质含量1502.样品蛋白含量的测定样品蛋白的比色结果如表，根据直线方程求出每支试管中蛋白质含量。试吕勺A595蛋白质含量1011根据公式求出样品绿豆芽蛋白质含量样品蛋白的体积蛋白质含量（ug/g鲜重）=测定时取样的体积称取样品的重量六.结果与讨论结果：绿豆芽蛋白质含量=g讨论：1.试液为混合均与就取样2.量取溶液时读数有误差3.读取A值时有读数误差4.比色杯中的误差