液相色谱实验报告

华南师范大学实验报告液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯

一、实验目的

1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；

2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。

二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。

三、主要仪器和试剂主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)配有紫外检测器，henomene_ODS柱；10L微量注射器试剂：苯标准溶液：10.0L/mL；甲苯标准溶液：10.0L/mL；苯、甲苯混合标准溶液：10.0L/mL；甲醇：80%；苯和甲苯混合待测溶液；

四、实验步骤

1、标准溶液的配制系列用100L的微量注射器分别量取10L、20L、50L、100L的苯和甲苯的混合标准溶液（10.0L/mL），再分别加入90L、80L、50L、0L甲醇将其稀释，作为待测液，其浓度分别为1L/mL、2L/mL、5L/mL、10L/mL

2、色谱条件优化按操作规程开机，并调好色谱条件，使仪器处于工作状态。控制流动相流速为甲醇：0.8mL/min、水：0.2mL/min；柱温30；检测波长254nm；观察记录保留时间，通过软件分析两峰分离效果。改变色谱条件，控制流动相流速为甲醇：0.95mL/min、水：0.05mL/min；柱温30；检测波长254nm；观察记录保留时间，通过软件分析两峰分离效果。通过观察两种色谱条件下的峰分离效果，选择最佳的色谱条件。若还不能达到最佳的分离效果，可以再设定不同的色谱条件，然后根据峰分离效果，选择最佳的色谱条件。

3、苯、甲苯定性分析在最佳条件下，待基线走稳后，用10L微量注射器分别进样5L苯和甲苯混合待测溶液，5L苯标准溶液（10.0L/mL）和5L甲苯标准溶液（10.0L/mL）(微量注射器用甲醇润洗35遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。

4、苯、甲苯定量分析最佳条件下，待基线走稳后，用10L微量注射器分别进样1.0L/mL、2.0L/mL、4.0L/mL、10.0L/mL的苯和甲苯混合标准溶液5L。观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线。

5、苯和甲苯混合待测溶液分析最佳条件下，待基线走稳后，用10L微量注射器进样苯和甲苯混合待测液5L，观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。根据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待测液的浓度，并计算试样中苯和甲苯的含量。

五、实验数据及分析高效液相色谱数据报告

一、色谱条件优化80%95%

二、定性分析苯甲苯样品苯甲苯保留时间3.7654.9

三、定量分析苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1ul/ml,2ul/ml,5ul/ml,10ul/ml。10ul/ml1ul/ml苯甲苯浓度峰面积浓度峰面积1ul/mlXXXul/mlXXXul/mlXXXul/mlXXXul/mlXXXul/ml153XXXX9210ul/ml190XXXX4310ul/mlXXXY=a_+ba=186510.8b=36165.15R2=0.XXXR=0.XXXY=a_+ba=278490.9b=146280.5R2=0.XXXR=0.999552

四、未知样品浓度未知样品苯甲苯浓度22.7ul/ml3.6ul/ml浓度12.9ul/ml3.6ul/ml

六、实验讨论由于实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单，只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果，因而采用标准曲线法。若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果，但由于实验操作及计算均较为复杂，实验及数据处理的时间长，效率相对不高，故实验中采用标准曲线法作为定量的方法。最佳色谱条件的选择是本实验准确度的关键。若苯与甲苯的峰分离效果过小，苯与甲苯的峰未能完全分离，必定影响其保留时间和峰面积的计算，是实验准确度减小，数据误差加大；若苯与甲苯的峰分离效果过好，虽然能将苯与甲苯的峰完全分离，实验准确度好，但是耗费的实验时间较长，效率不好。因而，应选择合适的色谱条件。为了提高标准曲线的拟合度，可以重复进样多次，并且由同一人进样，以免因个体习惯不同引起实验误差。进样针进样时确保进样针中没有残留气泡，另外，在进不同浓度或不同的物质前因先用乙醇溶液润洗干净，以免相互影响。5图表